Invitrogen反转录酶III采用大肠杆菌表达体系,是经过高度纯化的重组酶。该酶的RNA酶H活性很低,具有更高的热稳定性,广泛应用于链cDNA 的合成,反转录温度高达55°C,特异性和cDNA产量明显提高。
Invitrogen反转录酶III都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性:
1、DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物末端以方向合成DNA。反转录酶中不具有外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。
2、RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5端水解掉RNA分子。
3、DNA引导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。
除此之外,有些反转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。
Invitrogen反转录酶III注意事项:
对于GC含量比较高的RNA的反转录,试剂盒的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
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