ECL超敏发光液使用说明
试剂组成 | P1260-25ml | P1260-100ml | P1260-250ml |
ECL超敏发光液A | 12.5ml | 50ml | 125ml |
ECL超敏发光液B | 12.5ml | 50ml | 125ml |
保存条件:2-8度保存有效期12个月
产品概况
ECL化学发光液在HRP的催化下发生化学反应而发光,可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
大家的是在普通的化学发光液基础之让改进而来,相对于普通发光液来说,灵敏度更高,检测下限更低,可达到pg级别的抗原,并且一抗和二抗的稀释度更高。
本产品在5分钟后光强达到zui大,在30分钟时光强还能维持80%(以5分钟时光强为基础)。zui终发光时长可达一小时。
操作步骤
1.在二抗孵育完毕后,将发光液从冰箱取出到室温平衡。将印迹膜充分洗涤。
2.根据需要量,将A和B按照1:1的比例等体积混合,配制为化学发光检测底物工作液(例如:一张8cm×6cm的膜使用2ml工作液,为节省试剂,初次实验可用洗涤缓冲液测试,以zui少的液体盖住整个膜的表面)。
3.弃去洗涤缓冲液,转移到暗室或者避光盒里操作,将发光底物工作液滴加在印迹膜上,确保工作液覆盖整张膜,室温孵育5分钟。
4.去掉多余发光底物工作液,将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间,此过程应小心完成,避免膜与膜之间产生气泡。
5.在暗室内进行X-光胶片曝光,或将膜放置到荧光、化学发光成像仪内,按照仪器说明书进行检测。
6.因本产品发光发光超度高,发光时间长,所以为得到理想的结果,可多次曝光(不同时长)以得到理想的结果。
注意事项
1.为获得*实验结果,请务必优化实验条件,包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择,并且发光液请现用现配。
2.建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20(终浓度为0.05%),以减少非特异性结合。
3.由于叠氮钠是HRP抑制剂,在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
4.免疫印迹实验进行全过程中,请确保印迹膜始终处于湿润状态,避免干燥。
5.在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子,避免蛋白污染。
6.实验过程中,请使用洁净器材。保证非金属设备没有明显划痕,金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。
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