聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒使用说明书
DNA回收试剂盒使用说明书(PAGE回收)
试剂组成 | 20T | 50T |
溶胶液 | 5ml | 15ml |
结合液 | 20ml | 50ml |
漂洗液 | 15ml | 15ml |
洗脱液 | 1.5ml | 5ml |
研磨杵 | 20个 | 50个 |
过滤柱 | 20套 | 50套 |
吸附柱 | 20套 | 50套 |
本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和*的缓冲液系统,从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛
选、连接和转化等实验。配以特制的研磨杵和过滤柱,使你的操作更方便。
操作步骤:(所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心)
*次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇。
1、将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入1.5ml离心管中,称取重量,用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入2倍体积的溶胶液吹打混匀(每100mg胶加入200ul溶胶液),75℃水浴30分钟。
2、用1ml的去尖吸头汲取混合物至过滤柱中(将胶一起吸入,溶液过多时可分次加入)。13,000rpm离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管。
3、取六倍体积结合液加入原离心管(每100mg胶加入600ul),清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入),颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀,13,000rpm离心1分钟。将两次收集的滤出液混合。
4、将总滤出液混匀后加入吸附柱中(溶液过多时可分次加入),13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放入收集管中。
5、向吸附柱中加入600μl漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),13,000rpm离心30-60秒,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。
6、向吸附柱中加入600μl漂洗液,13,000rpm离心30-60秒,倒掉废液。
7、将离心吸附柱放回收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂
洗液。将吸附柱开盖置于室温3-5分钟,*晾干,以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
8、将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量65–70℃预热的洗脱缓冲液(20-30μl),室温放置2分钟。13,000rpm离心2分钟收集DNA溶液。
注意:①为了增加回收效率,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,13,000rpm再次离心1分钟。
②洗脱缓冲液体积不应少于20μl,体积过小影响回收效率。
③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。
9、DNA回收产物直接下一步实验或者-20℃保存。
注意事项:
1、电泳时使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
2、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
3、本试剂盒对<50bpDNA片段回收效率偏低(30%左右),如想回
收,应加大结合液的体积,延长吸附和洗脱的时间。
4、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越
小,回收率越低。
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